Т. Маниатис Э. Фрич Дж. Сэмбрук 4 страница

СИСТЕМЫ ВЕКТОР — ХОЗЯИН 43


-~г~


т~



~г~

ч U


—г~


—г~


ьс кЬ


ctt


IПГ 5 1 ,


red


ex;


rex


cl


(


— B‘

r-'1 x; ^ 1.7 <

^ X


m


/7


П


I I II Г(


I I' I 1 I '1 '1 I


:j! oo e. о

-j

LJ


□ — T "■* — “ ~ — П — — LT О С L йст>‘ои'отзст,о'17г,йа

° x £ cl 1г:Е^^ичх.Т1-'Г1 2D I X X U-


- F о СП


о

v;


£3


&


ill 11


о

-С.

ж


imrr 80


к.н53

EHI


"TT"



о о




Положение


(минимум)


шш-шш



жно


2,82 О

ЖШ]Р

Xho I Xho I


ш


4.4


РЕ


Xhol


6,86


Sol I Soil


8,5


P


Soil



Soli ‘


сайтов рестрикции

L-конец

. c

Bgi I

Bam I

55 6C

Kpn I

174 30

Kpn I

1895C

EcoRI

I994C

Sst I

2Ю40

Xbo I

Sst I

н tnd Ш

Ssi I

EcoRI

Hmd Ж

2792C

Bom I

285Ю

Bgl Я

338Ю

Xho I

Bg! 2

Kpn I

Bglfl •

Sal I

Sol I

Kpn I

Bgll

Bom I

Ssi I

Hind Ш

Bom I

Kpn I

Bgl Q

Sst I

Bom I

Bgl П

R-конец 48180

Xhol *

Soli

Литература: Blattner F. et al, 1977, Science. 196, 161: Williams B., Blaltner F„ 1979, J. Virol., 29, 555; de Wet J. et al.. 1980, J. Virol.. 33, 401 Примечание: Этот вектор используется для гоздания библиотек, полученных при полном расщеплении эукариотической ДНК рестриктазой EcoRI



[

illl ‘ '


и

u.

Ф i ■ f i м' * и I R( f. i н к ri .4 м f ■ щ' * н и * ■

... - ( M Л К и M M . 20,1


XbO I &< Т..ИК:. 4\\\\\\\\\\^VT

• r ■-; <■ r , i

Xapoii 4 A

Общая длина: 45,4 kb

Генетические маркеры: A am 32, Baml, lac5, bio256, VKH54, VNIN5, ^80 QSR Образует голубые бляшки n чашках с Xgal. Нуждается в бактерин-хозяинс с

супрессором suIII

Трудности, связанные со второй проблемой, можно свести к минимуму, если: с космидным вектором лигировать фрагменты эукариотической ДНК определенной длины (30—45 kb). Встраи­вание в одну космиду двух или более таких фрагментов приве­дет к образованию молекулы, которая окажется слишком боль­шой; чтобы она могла упаковаться в частицу бактериофага X.

Недавно был описан другой метод клонирования в космидах, обходящий первые две из указанных трудностей (Ish-Horowicz, Burke, 1981). В соответствии с предложенной процедурой, кото­рая была разработана для вектора pJB8 и схематически изобра­жена на рис. 1.10, препарат космидного вектора разделяют на две порции, каждую из которых расщепляют своим рестрикти- рующим ферментом; первый из этих ферментов делает разрыв с одной стороны от последовательности cos, а второй —с другой стороны от этой последовательности. Получающиеся в резуль­тате линейные молекулы ДНК дефосфорилируют, обрабатывая щелочной фосфатазой. Именно это дефосфорилирование пред­отвращает образование при лигировании тандемов векторов и снижает фон бактериальных колоний, содержащих космиды без





СИСТЕМЫ ВЕКТОР — ХОЗЯИН 45


-Г--- 1 г~ г


-1---- 1-- г

I ■ J '


* *.


~1------------ 1----------- г

•V.; .1


-I- j-- 1- г

< ' -4м 'V'1 И,D


<-■». С' 1,г


тт


L. •


:r г ‘ ‘ ’

, ; Г г


t

IT


* п


■ li м1: \ :1: "

Т- Т ’ Г

1 L гг : т


к1


' * ' ' ^...3 ■ ■

С' м * t

v1 t Ч

* tT)


кччччччч^ччччччччч^а

. >
- ■ гз Ц ' ’

] ^


Л)


(Т <т СС 21



J L



П с1 п (>ж* ‘н и( ■ гаитой рог г дикции


71 ( М И Н И М \ м

’ ^-гь

г i с W1


х\\\ччччч\ччч\ч^\чч^


1 к О Н 1' ц

\ ( о RI

Bgi П

4 7C

Bg: 3

359 60

Bom I

Bq1 П

36 320

Kpn I

i 74 3C

Bq I

Kpn I

189 50

Bq, П

370 30

Е со R1

Bom 1

3944C

Sst I

2i040

Sst I

Xba I

24 960

HindUI

Sst I

Bam I

Hmd Ш

2562C

Kpn I

4I83C

Sst I

Bg: П

EcoRI

Sst I

Hind Ш

Bom I

438 70

■Bam I

Bgi П

4 4050

Bgl H

32 510

R-конец

Bgl П

\

Литература: Blattncr F. et al., 1977, Sciencc, 196, 161; Williams В., Blattner F., 1979, J. Virol., 29, 555; de Wet J. et al., J980, J. Virol., 33, 401 Примечание: Этот вектор широко используется для создания библиотек фраг­менте)» эукариотической ДНК размером 15—20 kb


вставок. Затем обе дефосфорилированные ДНК расщепляют рестриктазой BamHI и смешивают их, чтобы получить липкие концы, которые можно лигировать с фрагментами эукариотиче­ской ДНК, полученными при частичном расщеплении рестрик­тазой Mbol или Sau3A с последующим дефосфорилированием. При такой процедуре получается лишь один тип способных упа­ковываться молекул, которые содержат фрагмент с «левым» сайтом cos, вставку длиной 32—42 kb и фрагмент с «правым» сайтом cos. Вектор pJB8 обладает тем дополнительным преиму­ществом, что он содержит два сайта для EcoRI, расположен­ных с обеих сторон от BamHI-сайта недалеко от него. Это поз­воляет почти точно вырезать встроенную ДНК. Методику эту, однако, легко приспособить и к другим существующим космид­ным векторам (с. 68—69). Эффективность метода достаточно высока, и при его использовании получают более 5-105 клонов




zz


NIN 5


% -
u
UJ


V)


Фермейт Вставка/замещение


HindlH


EcoRI


■Soli


Sst I


Xbo I


Xhol


Замещение


Замещение


Замещение


Замещение


Вставка


Вставка


EcoRI/Hindu Замещение


(максимум) 17,06 — =1


4,06 (минимум)


Hind Ш


HindHt


11,27

ч

EcoRI


EcoRI


5,Ю О

1 F


Soli Soil


9,90


Sst I


SstI


4,60 0


д

XboI Xbalш

4,60 0

, ■ IL .

Xhol Xhol


22.74

EcoRI


9,74


Положение сайтов рестрикции


L-конец

Bgtl

Bam I

' Kpn I

Kpn I

EcoRI

SstI

2Ю40

Xbal

SstI

HiruJIH

SstI

EcoRI

HindHI

Bom I

Soil

Sail

Xhol

Bam I

BglQ

HmdlH

Hindi

Bgl I

Bgin

BylE

R-конец


Sst i /Hmdm


Xbo I / Hmd Ш


EcoRI /Soil


EcoRI /Xho I


Sst I/Sol I


Xbo I /Sol I


Sol I/Xhol


Sst I/Xho I


Xbol/Xhol


Замещение


Замещение


Замещение


Замещение


Замещение


Замещение


Замещение


Замещение


Замещение


*2',64

Sst I


8.64


18,4 7

EcoRI 18,7 3

EcoRI

17,37

Ssf I


17,63


SstI


17,72


УЬа I


13,46


Xbol


13.71


Ц


Xbol


5,47


Soli


5,73


Xho I


4,37


•Soli

0.46


Soli 5.37 *


c-g! I Xho I


4.63


C.7I


p-

Xhol


Харон 17

Общая длина: 46,4 kb

Генетические маркеры: Iac5, NIN5, clam, Fee-. Образует голубые бляшки в чашках с Xgal. Образует лизогены в бак- териях-хозяевах с супрессором sull или suIII Литература: Williams В. G., Blattner F. R., 1979, J. Virol., 29, 555


НтбШ

4.72


Hind 12



48 ГЛАВА 1


—-- г

(■' Г I


О .V AS С 1 1


Ф(;р М ("*Н т


. i Г.' л I ИИ< '


м;н> I’M; г** *


; а


1V- .г Hi


Харои 20

Общая длина: 40,36 kb



СИСТЕЛШ ВЕКТОР - хозяин 49 •*


”1—

?*>


-г~

СП


'Т~

2Q


—г-

?.9


~г~

I


П—

Ч-j


~Г"

' * I .


г j


г



ЬЧ.'О


■► К L~S

К


4v;


ш



г'^: 11 (минимум!


I I ОЛ j/^ СИ И ■-

catn jh :..'vC г у. и г .:/■/


L ■ к он о:: h j


' I


ж


r' I - ^


зд

И ,n С

‘‘sl

4^

!^ur ►J n I


’4'V

ч - ■ *, ^

^ 5 о с

1 ' ■''

s


Генетические маркеры: Ы007, NIN5, imm434 Литература: Williams В., Blattner F., 1979, J. Virol., 29, 555


4- К/



50 глава ]


-- I-- I-- I-- I-- I ! I I-- I- 1- 1- 1-- 1- 1- 1- 1- 1-- 1- 1- 1- 1-- 1-- 1- 1- 1 ?—

Kb I 2 3 4 5 6 7 8 S *0 I' 12 13 14 15 16 18 19 20 21 22 23 24 25 26


cos L Nul


W B'


I i

"Ё c.. m x


Nu3 FE

D E FI 2 t V G

i I I 1 I I


fi


M


К I


tea


л:


a


viii^SS iiif


с

Cl


tn (л > о и a n л ел

LmJ ^


CQ


Я tn ТЗ 1/>

£ сл = ю


Wom.


Earn


b 1007


сс

о

О


Т

в

"'О

с


Фермент Встав ка-замещение


Hind Ж


Вставка


(максимум) 91 о(мин)


HmdIH HindHI


EcoRI


Вставка


9,1 0


EcoRI EcoRI


Sol I


Вставка


Xhol


Вставка


EcoRI / HindШ


Ktndffi/ Sol I


Hind Ш /Xho I


EcoRI/Sal I


EcoRI/XhoI


Замещение


Замещение


Замещение


Замещение


Замещение


11,05 К

=1 Р-


EcoRI Hind Ш 19.15


Hind Ш


15,25


Hmd Ж


21,08


EcoRI


17.19


Eco RI


Xhol/Satl


Замещение


Харон 21A

Общая длина: 41,7 kb

Генетические маркеры: Wam403, EamllOO, imro80, Vbl007, VKH53, VKH52, VNIN5. Нуждается в бактерии-хозяине с супресоором supE или supF


т



СИСТЕМЫ ВЕКТОР —ХОЗЯИН 5|


—I--------- 1 1--------------------------------------------------------- 1 1----------------------------------------- 1---- 1------------- 1 1--------------------------------------------------------- 1 г--------------------------------------- 1 г I I------------ 1 1--------------------------------------------------------- 1 1----------------------------------------- г---- 1------------ г

~2J 28 29 30 31 32 33 34 -35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 К&


к -3 о -О > Ё о > о- с о CL Х


ш Х


red К exo gam сШ го


г с

cl о П 0 Р


cos R


о а: о о иод о £

£ о -£--5 тсг)(Л

«.у.11


- X3^J'2'0|>>0>l>oQ.Q.C v\ □

ж о imi |®||ю<®т uii««|g


immeo KH53 KH52


MR!


=1 ddd a


t=>


NIN5


Положение сайтов


91 о

w

Sail Soli


- 9.10

.

Xho I Xhol


рестрикции

L-конец

ВдШ

Bom I

Kpn I

Kpn I

EcoRI

BamI

Bgi I

HindHI

Bgi I

Xhol

Bgl I

Kpn I

Bgl I

Soli

Kpn I

Ball

R-конец 41890

6,15


H

Soli


2.26


Xhol


4,19


Xhol


8J

Soli


13,0


Xhol


SolX


нипом Л?аАт«г пЛаТТНер и ДР,\ Заявка на систему вектор — хозяин для кло­нирования ДНК. Приложение IX. Данные о Хароне 21А

Этот бактериофаг широко используется в качестве вектора для

польчовЯ^апп^НТ0В' 9" содеРжит амбер-мутации, и потому его удобно ис-

ользовать при рекомбинационном скрининге с плазмидой nVX


Дата добавления: 2015-08-29; просмотров: 7 | Нарушение авторских прав

  • Путь силы. Достижение гармонии духа и тела 1 страница
  • Ручное выравнивание ресурсов
  • Глава 20. «Когда повсюду ты свой – это joy .»
  • НАСЛЕДНИЦА
  • Ответ: 18 м/с.
  • ЭКОПОСЕЛЕНИЯ РОССИИ
  • ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ) МЕРОПРИЯТИЙ. Медицинский контроль и санитарно-противоэпидемические (профилактические)
  • Упражнения.
  • ИЗУМРУДНЫЙ ГОРОД. Тут подошли все, остальные, и Железный Дровосек сердечно поздоровался с Львом и
  • Задача 12. 10.10.2000 арбитражным судом было вынесено по иску ОАО "Заря" решение о взыскании
  • It is a truth universally acknowledged, that a single man in possession 18 страница
  • 1.В матричной форме оценка вектора неизвестных параметров b регрессионного уравнения находится по формуле:
  • С) Жан-Поль Сартр 2 страница
  • Влияние структуры родительской семьи на психологическую готовность юношей к отцовству
  • Пренебрежение и отрицательные контакты
  • НАЛОГОВЫЙ КОДЕКС РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 32 страница
  • Отрасли права. Частное право Индонезии до сих пор носит дуалистический характер
  • Тема 10. Молодежная культурная политика
  • Третий роман об Анжелики повествует о ее отчаянной борьбе за жизнь и за восстановление честного имени невинно казненного мужа. 5 страница
  • Путешествие "Лунной тени" 2 страница